北京華盛譜信儀器有限責(zé)任公司

　HPLC分析儀器的普及和其在自動(dòng)化程度的提高，自動(dòng)進(jìn)樣模式取代了原來(lái)手動(dòng)模式，它大大提高了工作效率，增強(qiáng)了分析的精度，消除了人為誤差等等優(yōu)勢(shì)，越來(lái)越多的單位使用自動(dòng)進(jìn)樣器。與此同時(shí)，自動(dòng)進(jìn)樣器有時(shí)出現(xiàn)的故障往往會(huì)使人頭疼。要弄清楚故障發(fā)生的原因，有效地解決它的故障，首先要從日常維護(hù)和保養(yǎng)著手。

　　一、 自動(dòng)進(jìn)樣器常規(guī)維護(hù)

甲醇，乙腈，磷酸緩沖液是常用的流動(dòng)相。用的是反相C18色譜柱。

　　1. 平時(shí)分析好樣品，清洗好色譜柱后，用一根PEEK管連接在原先接色譜柱位置，用脫氣的純水以1.5mL/min流速清洗1.5小時(shí)，后用甲醇用同樣條件清洗。自動(dòng)進(jìn)樣器清洗液換上甲醇，打開(kāi)排液閥，用針筒抽吸越50mL，再關(guān)閉排液閥，purge，rinse各三次，結(jié)束后按shift，9，關(guān)閉自動(dòng)進(jìn)樣器。

　　純水清洗色譜系統(tǒng)能清除管路中殘存的緩沖鹽，甲醇清洗，防止系統(tǒng)滋生細(xì)菌和微生物堵塞管路，也可以洗去不溶于水的物質(zhì)。

　　2. 定期更換Septum cutout，編號(hào)：228-36215-91 即Rinse口帽中的橡皮墊，分析樣品設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣中有洗針的程序，所以一段時(shí)間后橡皮墊很容易臟。及時(shí)更換避免墊上臟物污染針頭。

　　3. 定期更換進(jìn)樣隔墊。編號(hào)228-33355-01。用固定扳手把進(jìn)樣口帽卸下，把里面的進(jìn)樣口襯筒sleeve取出，取下舊的進(jìn)樣墊，把新的原樣裝入，并原樣裝在進(jìn)樣口，用手把螺母擰緊，用扳手再擰約15°。

　　4. 用吸水紙插干凈控制進(jìn)樣針的升降軸上的油污和垃圾，用少量潤(rùn)滑油涂于升降軸上，涂好之后用吸水紙吸去多余的潤(rùn)滑油。測(cè)試幾個(gè)樣品，聽(tīng)升降軸工作時(shí)聲音清脆和聲音有規(guī)律為佳。

　　5. 長(zhǎng)期不用機(jī)器可以用純甲醇代替清洗液，針筒抽吸約100mL清洗液，后purge 和rinse幾次。

　　注：Rinse口螺帽和進(jìn)樣口襯筒及進(jìn)樣口螺帽若有鹽析或附臟物，先用純水，后異丙醇或甲醇放超聲波超洗10分鐘。洗去臟物后晾干裝上。

　　當(dāng)然在日常工作中必然會(huì)出現(xiàn)一些故障，這些故障一開(kāi)始會(huì)使我們很焦急，使我們束手無(wú)策。但是當(dāng)我們冷靜下來(lái)，一點(diǎn)點(diǎn)排查原因，會(huì)發(fā)現(xiàn)其實(shí)有些問(wèn)題很容易解決。諸如樣品盤放的位置不準(zhǔn)，進(jìn)樣時(shí)會(huì)出錯(cuò)，系統(tǒng)被停下來(lái)。只要放正樣品盤，錯(cuò)誤就會(huì)消失。工作中出現(xiàn)的小問(wèn)題大都較容易解決，自己動(dòng)手解決小故障，不僅能提高對(duì)儀器的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，而且還會(huì)有解決問(wèn)題后的喜悅。以下是筆者曾經(jīng)遇到的問(wèn)題和解決方法，這里寫(xiě)出來(lái)與大家共同探討。

　　二、自動(dòng)進(jìn)樣器常見(jiàn)的故障和解決辦法

　　1. 基線不穩(wěn)，鬼峰增多

　　現(xiàn)象： Fig1 a 和Fig1 b分析的是同一標(biāo)準(zhǔn)品。Fig1 a基線不穩(wěn)，鬼峰增多;而Fig1 b基線穩(wěn)定，為正常圖譜。

　　Fig1 a是基線不穩(wěn)，鬼峰增多的圖譜

　　Fig1 b是正常的圖譜，同時(shí)是清洗干凈后的圖譜

　　原因：在排除了泵，流動(dòng)相和檢測(cè)器問(wèn)題后，這種現(xiàn)象說(shuō)明進(jìn)樣系統(tǒng)被污染了。

　　解決方法：用5%的高氯酸水溶液代替原來(lái)的自動(dòng)進(jìn)樣器的清洗液，用針筒抽吸約100mL，在樣品瓶中裝入上述清洗液，用一根塑料阻尼管代替色譜柱，阻尼管出口處連廢液，不接檢測(cè)器。打開(kāi)泵，設(shè)置一個(gè)常規(guī)流速。設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣程序，進(jìn)樣量200μL，分析時(shí)間1分鐘，連續(xù)20次。結(jié)束后把清洗液換成純水，樣品瓶中裝純水，依上述同樣操作，(考慮到進(jìn)樣量較多，且重復(fù)次數(shù)多，準(zhǔn)備5個(gè)裝適量液體的樣品瓶，放入樣品盤中，設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣程序，每個(gè)瓶連續(xù)抽4次，5個(gè)樣品瓶合計(jì)抽20次，避免吸空)。

　　說(shuō)明： 5%的高氯酸水溶液能夠有效地去除系統(tǒng)中的污垢，如若無(wú)高氯酸，可用甲醇，純水大進(jìn)樣量多次清洗，也能起到同樣的效果。

　　2. 泵壓力突然降至0或很小

　　現(xiàn)象：在一次連續(xù)分析樣品過(guò)程中，開(kāi)始分析時(shí)系統(tǒng)很正常，但是到分析第八個(gè)樣品時(shí)突然發(fā)現(xiàn)泵壓降至0.3Mpa，而正常時(shí)泵壓為5.5Mpa。聞到進(jìn)樣器中有甲醇味(流動(dòng)相中甲醇含量很大)。打開(kāi)進(jìn)樣器門，發(fā)現(xiàn)排液閥下面的管子有液體滴出，帶有甲醇味，停止系統(tǒng)，按shift+9發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣口和rinse口鹽析很厲害。

　　原因：進(jìn)樣口被堵，流動(dòng)相無(wú)法進(jìn)入色譜柱，滲漏出來(lái)，致使泵壓下降。

　　解決方法：根據(jù)自動(dòng)進(jìn)樣器常規(guī)維護(hù)

　　3.和4.操作，更換進(jìn)樣隔墊和Septumcutout(若沒(méi)有備件，進(jìn)樣口密封圈和rinse口隔墊用純水→甲醇超洗干凈。)用擦鏡紙沾純水擦干凈進(jìn)樣口和rinse口旁的鹽析，再用甲醇擦洗。裝上兩個(gè)部件，打開(kāi)機(jī)器調(diào)試，無(wú)滲漏，泵壓正常即可。

　　說(shuō)明：筆者上一次做的實(shí)驗(yàn)是用較高濃度的磷酸緩沖鹽做流動(dòng)相，分析結(jié)束后用純水，后用甲醇清洗系統(tǒng)。可能清洗的時(shí)間不夠，后一次實(shí)驗(yàn)用的流動(dòng)相甲醇比例又很高，所以殘留在系統(tǒng)中的無(wú)機(jī)鹽被析出，色譜系統(tǒng)被堵住，引起滲漏。故在用過(guò)了高濃度無(wú)機(jī)鹽做流動(dòng)相，分析結(jié)束后一定要先用純水*洗凈色譜系統(tǒng)，(大概用1ml/min流速洗2至3小時(shí))再用甲醇*置換HPLC流路系統(tǒng)中的純水，避免鹽析。

　　3. 進(jìn)樣重現(xiàn)性不佳

　　原因：1)計(jì)量泵不準(zhǔn);

　　2)六位閥磨損。

　　解決方法：1)計(jì)量泵吸液準(zhǔn)確性判斷。在樣品瓶中裝入足量的純水，擦干凈外面的水分，用分析天平稱量，記錄讀數(shù)W1，放入進(jìn)樣盤，設(shè)置進(jìn)樣程序，進(jìn)樣量100μL，連續(xù)十次，結(jié)束后濾紙擦干樣品瓶表面的水分，置天平稱量，得讀數(shù)W2，W1-W2得的數(shù)值應(yīng)為1mL純水在相應(yīng)溫度的質(zhì)量。若差別不大，則計(jì)量泵無(wú)礙。若計(jì)量泵有問(wèn)題，有可能計(jì)量泵柱塞桿或密封圈有問(wèn)題。

　　2)六位閥磨損。根據(jù)自動(dòng)進(jìn)樣器說(shuō)明書(shū)，拆下六位閥，觀察是否三個(gè)口有磨損，若磨損嚴(yán)重，則更換新的六位閥，根據(jù)書(shū)上的操作，裝配好，調(diào)試，重現(xiàn)性良好即可。

　　以上筆者舉的例子都是平時(shí)工作中遇到的實(shí)例。對(duì)于自動(dòng)進(jìn)樣器的維護(hù)保養(yǎng)和故障排除是一次次經(jīng)驗(yàn)的積累。液相色譜的各個(gè)組件是互相的，如果一個(gè)部件有問(wèn)題或被污染，被堵塞，可能會(huì)影響后面的部件，同時(shí)也要檢查前面的部件是否有問(wèn)題。比如基線不穩(wěn)，要檢查檢測(cè)器是否被污染，檢查流動(dòng)相有沒(méi)有問(wèn)題，進(jìn)樣器是否臟了，色譜柱是否被污染，色譜柱是否沒(méi)有穩(wěn)定好，環(huán)境溫度是否穩(wěn)定等等。所以有時(shí)查問(wèn)題比機(jī)器維修更難。這就要我們?cè)诠ぷ髦卸喽喾e累經(jīng)驗(yàn)，多觀察，多動(dòng)腦筋。這才能熟悉您的機(jī)器，更好地用好機(jī)器。